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NGS引物

繼qPCR技術成為分子診斷的主流技術平臺后,第二代測序(NGS)技術的迅速發展給予了科學研究和醫學診斷領域更高的技術平臺及更廣闊的發揮空間。作為NGS應用的重要原料組成,NGS引物和常規PCR引物相比,對于純度、定量精確度、堿基序列準確性及交叉污染率提出了更高的要求。生工生物擁有二十多年引物合成經驗,我們針對NGS應用優化產品性能和質量,并提供全面的質量檢測。我們同樣擁有先進的NGS技術平臺,能對NGS引物的交叉污染率進行檢測。

NGS實驗流程包含樣品制備(核酸抽提/核酸制備)、文庫構建、上機測序和生物信息學分析幾個步驟。NGS相關引物主要體現在文庫構建的步驟中。其中,全基因組測序僅需要進行片段化和加接頭的文庫構建步驟,而全外顯子組測序和目標區域捕獲測序除了文庫構建的步驟還需要目標區域捕獲的步驟。

類型 NGS引物名稱
文庫構建 1接頭引物
目標區域捕獲
2雜交捕獲探針
3多重PCR引物
4封阻引物(Blocker)

在線訂購 在線引物設計

我們的優勢

  1.  優選合成原料,優化生產流程,確保極低的堿基錯誤率;
  2.   NGS接頭引物交叉污染率≤0.05%
  3.  關鍵質量指標動態批次間差異控制;
  4.  建立周期性質量跟蹤體系并定期出具質量跟蹤報告。

訂購信息

  文庫構建

NGS接頭引物

NGS Adaptor Primer

接頭的本質是一段短的堿基序列,基本包括三個部分:與flow-cell上面寡核苷酸相同或互補的片段P5/P7;測序時測序引物結合部分R1/R2;用于區分不同樣本的Index。接頭是待測DNA片段與Flow-cell連接的橋梁,目的片段連接接頭后可以在flow cell上擴增再測序。生工生物可以按您的要求定制各種不同類型的接頭引物,并可提供獨立單鏈、雙鏈混合和雙鏈退火三種不同形式分裝的接頭引物。

純化方式 堿基范圍 交付形態 包裝形式 額外QC 合成周期
NGS 接頭引物單鏈
HPLC_CE (IVD) 20~70 mer 干粉
液體
管裝 純度(CE) 咨詢
NGS 接頭引物雙鏈預混(不退火)
HPLC_CE (IVD) 20~70 mer 干粉
液體
管裝 純度(CE) 咨詢
NGS 接頭引物雙鏈預混退火
HPLC_CE (IVD) 20~70 mer 干粉
液體
管裝 純度(CE) 咨詢

  目標區域捕獲

雜交捕獲探針

Hybrid Capture Probes

雜交捕獲探針根據DNA堿基互補原理,設計與目標捕獲區互補的DNA捕獲探針(帶biotin修飾)。在實驗過程中,先將待捕獲的基因組DNA構建標準NGS文庫,進一步使用捕獲探針與NGS文庫雜交,然后使用鏈霉素磁珠富集雜交后的DNA文庫,洗脫探針后進一步PCR文庫即可NGS測序。生工生物可提供常規合成引物池探針(≤10,000條)和芯片合成引物池探針(≥2,000條)。

純化方式 堿基范圍 交付形態 包裝形式 額外QC 合成周期
雜交捕獲探針單管合成
HPLC 80~120 mer 干粉
液體
管裝
96孔板
384孔板
純度(CE) 咨詢
雜交捕獲探針常規合成引物池(條數3~10,000條)
HPLC 80~120 mer 干粉
液體
管裝
96孔板
384孔板
- 咨詢
Twist®*雜交捕獲探針芯片合成引物池(條數≥2,000條)
無需純化** 80~120 mer 液體 管裝 - 咨詢

備注:

*Twist屬于美國Twist Bioscience注冊商標,此項技術平臺來源美國Twist Bioscienc提供的專利芯片Probe 合成技術平臺; **由于芯片合成每條Oligo均在獨立的微反應器中合成,所以本身就是一種物理分隔,加上合成的準確度很高,QC也會對純度進行檢測,故無需額外純化。

多重PCR引物

Multiplex PCR Primers

通過多重PCR的方法來進行目標區域捕獲適合大規模的樣本和小片段/位點的富集。和雜交探針捕獲的方法比,常規情況下,多重PCR的費用也更加經濟。

純化方式 堿基范圍 交付形態 包裝形式 額外QC 合成周期
多重PCR引物單管合成
不限 18~60 mer 干粉
液體
管裝
96孔板
384孔板
純度(CE) 咨詢
多重PCR引物常規合成引物池(條數≤10,000條)
不限 18~60 mer 干粉
液體
管裝
96孔板
384孔板
- 咨詢

封阻引物(Blocker)

Blocker Primers

NGS Blocker引物通常用于捕獲建庫過程中阻止文庫接頭的雜交,提高捕獲測序的特異性。生工生物提供定制Blocker引物,并可出具包含純度、分子量等信息的檢測報告。

純化方式 堿基范圍 交付形態 包裝形式 額外QC 合成周期
HPLC ~ 干粉
液體
管裝 純度(CE) 咨詢

質量控制

  質譜檢測(MS):確保極低的堿基錯誤率

分子量質譜檢測實例

測試引物理論分子量為8052.67。通過質譜檢測,實測分子量為8052.5,分子量誤差經計算為-0.002%,

小于質控標準±0.05%。測試引物質譜檢測合格,堿基序列的正確性在質量可控制范圍之內。

  交叉污染率(CCR):NGS接頭引物使用 HPLC_CE(IVD) 作為純化方式,交叉污染率<0.05%,使用HPLC作為純化方式,交叉污染率<0.1%

2019年Q1~2020年Q2季度NGS接頭引物交叉污染率抽樣檢測

檢測高通量接頭/引物合成制備過程中的交叉污染,將index引物建好文庫,進行高通量測序,

計算不同組合的序列頻數。根據頻數計算每一條index引物的交叉污染概率

資源

文檔下載
引物合成線下訂購表(128 KB) 引物定制合成手冊(1.84 MB)
工業產品手冊(7.17 MB) 引物使用說明書(1 MB)
修飾基團說明手冊(4 MB)

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收起列表

工具
引物在線設計 在線Oligo分析器
常見問題
引物純化方法選擇 引物在線訂購指南
引物質檢項目說明
產品促銷
2020年引物合成網購促銷 [2020-9-1]
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